免疫共沉淀
(1)技術(shù)原理
免疫共沉淀:免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
(2)技術(shù)應(yīng)用
篩選調(diào)控蛋白在基因組上的結(jié)合靶點(diǎn):針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子、DNA/RNA 聚合酶、轉(zhuǎn)錄復(fù)合物等調(diào)控因子蛋白進(jìn)行特異性的富集,分離純化與之結(jié)合的靶 DNA 片段并測(cè)序,分析篩選到準(zhǔn)確有效的靶位點(diǎn)、靶基因數(shù)據(jù);揭示差異化表觀遺傳變異的原理:通過對(duì)不同表型組織內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其他結(jié)合蛋白進(jìn)行染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序并定量分析靶基因表達(dá)調(diào)控水平或針對(duì)同種組蛋白進(jìn)行甲基化、磷酸化、泛素化修飾所導(dǎo)致的結(jié)合位點(diǎn)變異進(jìn)行分析,即可準(zhǔn)確揭示差異化表觀變異原理;研究表觀遺傳變異疾?。航柚旧|(zhì)免疫共沉淀測(cè)序技術(shù)結(jié)合生物信息分析揭示由蛋白與 DNA 相互作用變異而引起的疾病的原理,明確表觀遺傳修飾在癌癥等表觀遺傳變異疾病的發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制。
【服務(wù)內(nèi)容】
蛋白質(zhì)抽取與定量;SDS-PAGE分離Co-IP產(chǎn)物;Co-IP實(shí)驗(yàn)(以normal lgG作為對(duì)照);western blot或質(zhì)譜鑒定。
(1)客戶須明確檢測(cè)目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。
(2)客戶需提供待檢測(cè)樣品、免疫沉淀用抗體和WB檢測(cè)用抗體(抗體也可由我們代購);
(3)待檢測(cè)樣品可以是直接的待檢測(cè)蛋白樣品,也可以是細(xì)胞、組織或細(xì)菌樣品,但需收取蛋白抽提費(fèi)用。樣本收集后應(yīng)立-80℃保存;
(4)免疫沉淀盡量提供未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。