細(xì)胞轉(zhuǎn)染
(1)技術(shù)原理
將外源性基因(載體)轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi),已成為研究基因與細(xì)胞功能的重要手段,目前常用的包括小RNA干預(yù)(RNAi)和外源性表達(dá)載體轉(zhuǎn)入兩種手段,二者分別發(fā)揮基因沉默和基因表達(dá)的功能,在實現(xiàn)基因敲除、鑒定基因的生物學(xué)特性、研究基因表達(dá)與沉默對于細(xì)胞生長及相關(guān)因子的影響、研究基因表達(dá)的調(diào)控機制等方面發(fā)揮重要作用。
轉(zhuǎn)染的方法較多,有脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染以及病毒感染等,依據(jù)轉(zhuǎn)染持續(xù)時間又分為兩種,一種是瞬時轉(zhuǎn)染,外源性DNA不整合到細(xì)胞染色體,轉(zhuǎn)染可以維持24-96小時,用于研究轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的功能變化、基因或蛋白的變化等;一種是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源性DNA整合到細(xì)胞染色體,可以持續(xù)表達(dá)外源性基因,用于穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建。
(2)技術(shù)應(yīng)用
隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具,在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用越來越廣泛。
【服務(wù)內(nèi)容】
載體構(gòu)建(或客戶自備載體);細(xì)胞培養(yǎng)與瞬時轉(zhuǎn)染;WB和qPCR檢測。
【客戶須知及標(biāo)本要求】
1、客戶須明確檢測目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。
2、客戶提供生長狀況良好的細(xì)胞株,同時提供細(xì)胞特性,培養(yǎng)條件及相關(guān)注意事項;公司也可以為客戶代購細(xì)胞并且提供保種服務(wù);
3、客戶提供質(zhì)粒,詳細(xì)說明該質(zhì)粒的大小、濃度、抗性、拷貝數(shù)等相關(guān)背景資料。