實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)
(1)技術(shù)原理
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,已廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究、病原體定量檢測(cè)、疾病分類(lèi)及其發(fā)病機(jī)理等生命科學(xué)領(lǐng)域。
(2)技術(shù)應(yīng)用
DNA或RNA的相對(duì)定量分析:包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè),轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè);基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過(guò)不同處理的樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)、特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異。
【服務(wù)內(nèi)容】
RNA抽取與定量;反轉(zhuǎn)錄;引物設(shè)計(jì)及熒光定量PCR、數(shù)據(jù)分析。
(1)客戶(hù)須明確檢測(cè)目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。
(2)提供新鮮樣品,組織樣本:質(zhì)量大于100mg;細(xì)胞樣本,細(xì)胞數(shù)大于106;全血樣本(EDTA抗凝):2~5ml。
(3)提供待測(cè)基因的全長(zhǎng)基因序列或NCBI中的序列號(hào)。
(4)提供盡可能詳細(xì)的背景資料: DNA/ RNA 來(lái)源、豐度等,如果是cDNA序列請(qǐng)標(biāo)明外顯子拼接位點(diǎn)。
組織 CDH-1 PCR電泳圖